自发光植物——农杆菌介导的植物花瓣瞬时转化技能及使用

来源:kaiyun官网    发布时间:2024-03-17 12:15:42

  阿凡达2的上映,让咱们重温了十四年前那场冷艳世人的灿烂发光世界。回到实际,在地球上也有相似的发光生物,比方海洋里的发光藻,山林里的发光蘑菇,以及小溪边的萤火虫等……仅仅没那么绚烂的颜色。天然界中是不是真的存在会发光的植物呢?现在尚无结论。

  农杆菌是都会存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在天然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位,并诱导发生冠瘿瘤。根癌农杆菌中含有Ti质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌经过侵染植物创伤进入细胞后,可将T-DNA刺进到植物基因组中。因而,农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。

  根据这套天然的转化体系,咱们将发掘出的真菌自发光通路基因,组装成表达模块,构建载体,使用农杆菌介导的植物瞬时转化技能,经过菌液复苏、制备侵染液、打针植物花瓣(现在较为老练的转化部位有叶片和花瓣,为添加发光植物的观赏性,咱们终究挑选了花瓣进行瞬时转化),成功将其转入植物细胞核内,并行使功用,终究发生了肉眼可见的植物自发光!

  1、LB培育基、Kan抗生素、0.5× PBS缓冲液、AS(乙酰丁香酮)

  该著作在Bio-protocol第三届生物试验短视频大赛中荣获三等奖,欢迎拜访网站检查原视频:

  1. 首要预备资料置于超净工作台,取待活化菌液, 用200 μL枪头,拌和混匀后蘸取菌液,在LB固体培育基外表悄悄划线。用封口膜密封后,转移至28℃恒温培育箱,倒置培育过夜。

  2. 次日,在超净台中,向15 mL摇菌管中参加10 mL LB培育液,用200 μL枪头刮取适量培育基外表新成长菌体,连带枪头打入摇菌管。转移至28℃摇床,200 rpm培育过夜。3. 次日,在超净台中,向100 mL三角瓶中倒入50 mL LB培育液,参加1 mL活化的菌液,置于28℃摇床,200 rpm培育过夜。

  1. 预备资料置于超净台,向100 mL灭菌的三角瓶中参加78 mL双蒸水,2 mL 20 × PBS缓冲液。倒置混匀AS试剂后,汲取8 μL AS试剂参加三角瓶中,悄悄摇摆混匀,完结制造0.5% PBS溶液(含0.1 mM AS)。

  2. 将大摇菌液均匀分装于2个50 mL离心管,5,000 rpm离心10分钟,搜集菌体。

  5. 缓慢移去上清液,参加5 mL配备好的0.5% PBS溶液(含0.1 mM AS)至50 mL离心管中,悄悄吹打混匀。待菌体彻底重悬,补加适量0.5% PBS溶液(含0.1 mM AS),悄悄摇匀。

  1. 用打针器针头在每片花瓣中心悄悄扎孔,用1 mL打针器汲取侵染液,笔直花瓣针口处打针。

  留意:缓慢发力,调查水渍状况,待沁润整片花瓣停止,顺次打针下一片花瓣。留意操作轻柔,防止损害花瓣。

  留意:打针前期及暗处理阶段,请勿洒水,待暗处理完毕后,可依花苗状况适量洒水。

  王晓娟,深圳华大生命科学研讨院-数字化地球研讨所,主要是做植物基因组编写技能开发及使用演示,以农杆菌介导的植物瞬时转化技能为东西将真菌自发光通路整合到植物细胞内发挥功用;

  陈立川,深圳华大生命科学研讨院-数字化地球研讨所,主要是做植物细胞多组学研讨,经过生物信息学等技能发掘真菌自发光代谢通路及其调控基因,并规划表达模块使其在植物细胞内发挥功用。

  感谢深圳华大生命科学研讨院供给试验渠道。感谢项目负责人夏科科教师,以及研讨院各部门教师供给的技能支持。

  Bio-protocol于2011年在斯坦福大学创立, 致力于树立全球威望的、高质量的生物试验计划共享渠道,以助力科学发现。

  Bio-protocol期刊是Bio-protocol旗下的一份同行评定的世界学术期刊,宣布高质量的生命科学试验计划,旨在进步科研的可重复性。至今,

  eLife等12家世界威望科学杂志树立长时间协作伙伴关系,一起促进生命科学研讨的可重复性。2019年

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